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                你還在糾結是做MTT還是CCK8?

                日期:2022-04-22瀏覽:299次

                細胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種,檢測藥物或者新型材料在生物環境中的毒性情況,即通過檢測材料或者藥物對細胞的增殖或者生長的影響,來評價藥物或材料的毒性或者活性,主要用于藥物活性篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、抗腫瘤藥效測定等;常用MTT法或者CCK-8法檢測,另外也可以通過Live/dead雙染法進行細胞成像,更直觀的記錄細胞的存活情況。


                細胞增殖檢測實驗的意義:

                細胞增殖是細胞在周期調控的因子下,通過DNA復制等反應,完成細胞分裂的過程。增殖檢測一般用于分析分裂中的細胞數量的變化,進而反應細胞的生長狀態及活性,目前廣泛應用于腫瘤生物學,分子生物學,藥代動力學等領域。


                MTT法

                在活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍紫色甲臢化合物,用二甲基亞砜(DMSO)將其溶解成溶液,用酶標儀測定其濃度(OD490或者570),從而定量測定細胞的存活比例,細胞增殖越多越快,對應的吸光度越高;細胞毒性越大,對應的吸光度越低。

                CCK-8法 

                CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內的脫氫酶驗明正身。在脫氫酶作用下,WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產物,用酶聯免疫檢測儀在OD 450nm波長處測定其光吸收值。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。


                CCK8與MTT法的主要區別如下:

                一、原理不同

                1、Cell Counting Kit-8:CCK-8 試劑盒最先是由日本同仁化學研究所(Dojindo)開發的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。

                2、MTT法:其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。

                二、特點不同

                1、Cell Counting Kit-8:靈敏度高,數據可靠,重現性好;操作簡便,省時省力;水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細胞;無需放射性同位素和有機溶劑,對細胞毒性低;適合于高通量藥物篩選。

                2、MTT法:特點是靈敏度高、經濟。

                目前市面上能提供的CCK-8試劑盒有國產,進口分裝以及進口原裝之分,國產的CCK-8試劑盒在質量穩定性不亞于進口原裝,同樣具有較好的檢測結果,同時價格方面低于進口原裝,具有高的性價比。



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